Diagrama da Tecnologia de Contraste de Fase
em Microscópios Ópticos
Por Anderson Mace e
Christian Miles
Para um bom uso do equipamento de microscopia óptica laboratorial o
analista deve conhecer o tipo de engenharia utilizada na sua ferramenta de
trabalho – o microscópio. Para isso, vamos fazer uma apresentação sintética de
dois modelos tecnológicos utilizados. O microscópio com e sem Contraste de
Fase.
Espécimes biológicos que não tenham sido corados, em geral, se
apresentam transparentes, o que torna sua observação difícil ao microscópio
óptico comum, já que o detalhamento da imagem fica prejudicado pela proximidade
das densidades ópticas e, índices de refração das diferentes partes do tecido
das células.
O microscópio de contraste de fase é um
instrumento que converte diferenças do índice de refração que não podem ser
vistas, em diferenças de intensidade que se tornem visíveis. As ondas de luz
que atravessam os componentes celulares de densidades ópticas diferentes assim
o farão em diferentes velocidades. Desse modo, as ondas luminosas que atravessam
núcleos, mitocôndrias e inclusões celulares emergirão em tempos diferentes e em
fases diversas, de um elemento em relação ao outro facilitando a identificação
digital das células nos “Plug-ins” de leitura.
Há também a microscopia de fase diferencial
(microscopia de Nomarski), capaz de produzir imagens que se apresentam
aparentemente tridimensionais durante a observação do espécime. Este tipo de
microscópio também pode ser denominado microscópio de diferença
“interferencial” de contraste segundo Nomarski.
As imagens abaixo servem para comparar as
tecnologias, nas quais se torna notável a diferença entre a observação da mesma
imagem no microscópio óptico convencional e no microscópio de contraste de
fase.
Amostras superiores em Microscópios
com Contraste de Fase, inferiores sem Contraste de Fase
Espermatozoides de Equino com Contraste de Fase
Espermatozoides de Equino sem Contraste de Fase
Amostra em Microscópio com Contraste de Fase (Filtro Ativo Verde)
Câmara de Makler
Existem aberturas ópticas especiais na tecnologia de contraste de fase
(existem kits vendidos separadamente que podem ser instalados em microscópios
sem esta tecnologia) em filtros que
absorvem e mudam as fases situadas dentro do “condensador” e das lentes
objetivas do microscópio de contraste de fase que convertem as diferenças de
fases em intensidade diferentes.
Dispositivo de Contraste de Fase
O microscópio de fase é particularmente útil no estudo dos tecidos não
corados e de células vivas (neste caso os espermatozoides). O simulador de
contraste do Mace Sperm Tracker® tem como intuito tornar mais acessível à
análise computadorizada de sêmen, sabendo que nem todos os profissionais
possuem um microscópio com contraste de fase.
Mas, como é possível simular um contraste de fase? No Mace basta aumentar o
contraste entre os espermatozoides e o plano de fundo no configurador do
gravador de vídeo (MacEye®) e no configurador de Plug-in por espécie, contando também com a inversão
das cores (preto e branco).
Plug-in do Mace Sperm Tracker®
O algoritmo Spermorphos do
Mace Sperm Tracker® inverte a imagem do campo de observação gravado a partir do
microscópio. No início do processo de análise dos vetores de motilidade o
algoritmo codifica a
imagem gerando um contraste de fase “simulado” tornando o método de análise
mais limpo e claro para o Plug-in do Mace detectar e contabilizar precisamente
os espermatozoides da amostra.
Fiquem bem
Texto: Anderson Mace e Christian Miles (Veterinário)
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